不溶性微粒應用專題 | 有色樣品的不溶性微粒測試

摘要：為探究有色樣品的顏色對光阻法檢測不溶性微粒是否存在影響，本實驗以深紅色血液制品為對象，加入標粒之后檢測，觀察標粒粒徑是否偏移；本實驗采用了美國Accusizer A2000 USP不溶性微粒檢測儀進行測試，實驗結果有力表明，該設備在檢測紅色樣品時抗干擾能力強，可以提供可靠的不溶性微粒檢測數據。

關鍵詞：不溶性微粒；光阻法；有色樣品；血液樣品；檢測干擾

不溶性微粒（Sub-visible Particle），為不溶于水和有機溶劑、非代謝的、肉眼所看不見的顆粒物，通常指粒徑＜50μm的微粒。注射劑中的不溶性微粒主要來源為生產過程中各類包裝容器黏附的各種微粒、生產原料以及生產工藝操作中產生的不溶性微粒，進入人體可能引起各種不良反應。

光阻法（LO/LE，Light obscuration/Light Extinction），又稱光遮蔽法、光消減法，其基本原理是使樣品液流經一個狹窄的流通池，激光束穿過流通池并被光電探測器接收，當溶液中的顆粒通過光束時，會遮擋部分光線，引起光強變化，該變化與顆粒的投影面積成正比，通過信號處理可換算為顆粒的粒徑與數量。

由于光阻法檢測速度快、定量精準度高、重復性佳，且能同時測定微粒大小和數量，適用于大范圍粒徑區間微粒分析，在現行的中國藥典通則 <0903> 不溶性微粒檢查法和美國藥典 < 788 > 中，均將光阻法列為方法學，光阻法是制藥行業及相關領域不溶性微粒控制的標準檢測方法。

不過，基于光阻法的光學方法學特性，且目前市場上主流光阻法儀器多采用波長約 630-650nm 的紅色激光作為光源，一個值得探討的問題是：其檢測結果是否會受到樣品本身物理特性的干擾，尤其是樣品的顏色，會不會成為關鍵影響因素？對于紅色樣品（如含鐵制劑）而言，會不會因自身顏色干擾檢測過程，使得測試結果變得不可靠？

因此，面對這類有色樣品時，光阻法設備是否能夠準確測試出顆粒的粒徑和濃度結果，就成為了需要重點考量的問題。

為考察顏色對光阻法檢測的影響，我們以某血液制品為樣本，該樣品呈紅色，使用AccuSizer A2000 USP不溶性微粒檢測儀進行不溶性微粒測試。

圖1 樣品原液、5倍稀釋、10倍稀釋

如圖1所示，樣品原液、5倍稀釋樣品、10倍稀釋樣品均呈現為不透明的深紅色，其中樣品原液接近黑色，隨著稀釋倍數的遞增其顏色深度呈梯度減淡，但仍然保持深紅色的基本顏色特征。

在實驗設計中，使用添加標粒的方式進行對照測試以評估原液顏色對于測試結果的影響。

將24μm標準粒子加入純化水中，測試其平均粒徑，作為對照組，將24μm標準粒子加入不同梯度稀釋倍數的樣品中，測試其平均粒徑，探究顏色對標粒粒徑結果是否有影響。

圖2 水+24μm標粒測試結果譜圖

圖3 樣品原液+24μm標粒測試結果譜圖

圖4 五倍稀釋樣品+24μm標粒測試結果譜圖

圖5 十倍稀釋樣品+24μm標粒測試結果譜圖

將24μm標粒添加到純化水中，平均粒徑為23.971μm，然后將24μm標粒添加到樣品原液中制得樣1，進行檢測，平均粒徑為23.734μm，濃度2225顆/mL，將樣1稀釋5倍，測試的平均粒徑為23.734μm，濃度537顆/mL；再將樣1稀釋10倍，平均粒徑為23.951μm，濃度254顆/mL。

實驗數據顯示，相比加入純水中的標粒結果，原液添加標粒的檢測結果存在輕微粒徑偏移，但隨著稀釋倍數的增加，該偏移現象減弱，說明樣品基質對檢測的干擾有限。盡管原液為深紅色，其光學特性未對粒徑識別與計數造成顯著影響，證明該樣品直接進行該顏色狀態下的不溶性微粒檢測，顏色因素未導致明顯系統誤差。

此外，報告中還進行了儀器狀態驗證，使用美國MML公司提供的0.8、2、5μm混合標準顆粒進行校準，確保檢測系統在粒徑識別與計數方面的準確性。在設定檢測下限為5μm的前提下，不同閾值下的測試結果重復性良好，進一步支持了該方法在有色樣品中的適用性。

綜上，通過實際測試案例可知，盡管光阻法在理論上可能受到樣品顏色的干擾，但AccuSizer A2000 USP不溶性微粒檢測儀在檢測紅色血液制品時，仍能保持高準確性與重復性。該儀器具備抗顏色干擾能力，能夠為有色樣品如含鐵制劑、血液衍生物等提供可靠的不溶性微粒數據。

圖6  AccuSizer A2000 USP不溶性微粒檢測儀

AccuSizer A2000 USP不溶性微粒檢測儀是Entegris（PSS）旗下的專業檢測設備，采用單顆粒光學傳感計數（SPOS）技術，融合光阻效應與光散理論，實現精準檢測。設備檢測范圍覆蓋 0.5-400μm，有1024數據通道與32自定義通道，兼具 0.01μm 超高分辨率和10PPT級超高靈敏度，最小進樣量低至50μL，微量進樣仍保持高準確性。

設備采用模塊化設計，支持自動進樣、自動稀釋等功能拓展，軟件符合 FDA 21 CFR Part11 及cGMP規范，符合ChP、USP、JP 等多國藥典標準與法規報告，可滿足研發、質控全流程需求。